分光光度計(jì)的使用

德赫機(jī)械

分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室中用于定量分析物質(zhì)濃度的核心儀器，通過測(cè)量物質(zhì)對(duì)特定波長(zhǎng)光的吸收程度（吸光度），結(jié)合朗伯-比爾定律（A=ε?c?l），可間接計(jì)算目標(biāo)物質(zhì)的濃度。以下是其使用流程、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)的詳細(xì)說明：

---

一、使用前準(zhǔn)備

• 儀器檢查
  • 開機(jī)預(yù)熱：開啟電源后，儀器需預(yù)熱15-30分鐘（紫外可見分光光度計(jì)需預(yù)熱更久），確保光源穩(wěn)定。
  • 光源檢查：確認(rèn)鎢燈（可見光區(qū)）或氘燈（紫外光區(qū)）正常點(diǎn)亮，無閃爍或異常噪音。
  • 波長(zhǎng)校準(zhǔn)：使用鈥玻璃、汞燈等標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)驗(yàn)證波長(zhǎng)準(zhǔn)確性（如546.07 nm、486.13 nm等特征峰）。
    
• 試劑與樣品準(zhǔn)備
  • 空白對(duì)照：使用與樣品相同的溶劑（如去離子水、緩沖液）作為參比溶液，消除溶劑背景吸收。
  • 樣品處理：確保樣品澄清透明，避免懸浮顆粒干擾（如需離心或過濾）。
  • 濃度范圍：根據(jù)預(yù)估濃度稀釋樣品，使吸光度落在0.2-0.8（線性范圍）之間。
    
  
  

---

二、操作步驟

• 波長(zhǎng)設(shè)置
  • 根據(jù)目標(biāo)物質(zhì)的吸收峰選擇波長(zhǎng)（如核酸在260 nm，蛋白質(zhì)在280 nm）。
  • 示例：測(cè)定DNA濃度時(shí)，設(shè)置波長(zhǎng)為260 nm。
    
• 調(diào)零（基線校正）
  • 將空白對(duì)照溶液倒入比色皿（光程通常為1 cm），放入樣品室。
  • 調(diào)節(jié)“調(diào)零”或“Abs 0”旋鈕，使儀器顯示吸光度為0.000。
    
• 樣品測(cè)量
  • 倒出空白溶液，用待測(cè)樣品潤(rùn)洗比色皿2-3次，再注入樣品。
  • 擦拭比色皿外壁水漬，放入樣品室，關(guān)閉艙門。
  • 讀取吸光度值（A）或透光率（T，T=10?A）。
    
• 數(shù)據(jù)處理
  • 單波長(zhǎng)法：直接使用吸光度值計(jì)算濃度（c=A/(ε?l)）。
  • 雙波長(zhǎng)法：選擇兩個(gè)波長(zhǎng)（如260 nm和280 nm），通過差值消除雜質(zhì)干擾。
  • 標(biāo)準(zhǔn)曲線法：測(cè)定一系列已知濃度標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度，繪制線性回歸方程，再計(jì)算未知樣品濃度。
    
  
  

不知道叫啥

好文推薦，大家都來看看吧。

貝碧加

這個(gè)問題確實(shí)值得從不同角度去思考，每個(gè)人都有自己的見解。

悲傷的荷包蛋

感謝大家的討論，讓我收獲良多。

倒數(shù)

謝謝分享，幫大忙了