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液相色譜儀主要由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)（色譜柱）、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)五部分組成，工作流程如下： - 輸液系統(tǒng)（高壓泵）
- 功能：將流動(dòng)相（液體溶劑）以恒定流速和壓力輸送至色譜柱，確保分離過(guò)程的重復(fù)性和穩(wěn)定性。
- 關(guān)鍵參數(shù)：
- 流速：通常為0.1-10 mL/min，影響分離效率和保留時(shí)間。
- 壓力：高效液相色譜（HPLC）壓力可達(dá)40-60 MPa（400-600 bar），以克服固定相的高阻力。
- 類(lèi)型：
- 單泵：適用于等度洗脫（流動(dòng)相組成恒定）。
- 雙泵/四元泵：通過(guò)比例閥混合不同溶劑，實(shí)現(xiàn)梯度洗脫（流動(dòng)相組成隨時(shí)間變化）。
- 進(jìn)樣系統(tǒng)
- 功能：將樣品定量注入流動(dòng)相，形成均勻的樣品帶進(jìn)入色譜柱。
- 類(lèi)型：
- 手動(dòng)進(jìn)樣閥：通過(guò)旋轉(zhuǎn)閥芯切換樣品環(huán)位置，適用于低通量分析。
- 自動(dòng)進(jìn)樣器：可編程控制進(jìn)樣體積（通常0.1-100 μL）和順序，提高分析效率。
- 要求：進(jìn)樣體積需精確，避免樣品擴(kuò)散導(dǎo)致峰展寬。
- 分離系統(tǒng)（色譜柱）
- 核心組件：由不銹鋼或聚醚醚酮（PEEK）管材制成，內(nèi)填充固定相（顆粒直徑通常1.7-10 μm）。
- 固定相類(lèi)型：
- 反相色譜（RP-HPLC）：固定相為非極性（如C18、C8），流動(dòng)相為極性（水/有機(jī)溶劑混合），適用于分離極性差異大的化合物（如藥物、代謝物）。
- 正相色譜（NP-HPLC）：固定相為極性（如硅膠、氨基），流動(dòng)相為非極性（正己烷/異丙醇），適用于分離極性化合物（如脂類(lèi)、甾體）。
- 離子交換色譜（IEC）：固定相帶電荷（如磺酸基、季銨基），通過(guò)靜電作用分離離子型化合物（如氨基酸、蛋白質(zhì)）。
- 尺寸排阻色譜（SEC）：固定相為多孔凝膠，按分子大小分離（如蛋白質(zhì)、聚合物）。
- 分離原理：
- 分配系數(shù)（K）：組分在固定相和流動(dòng)相中的濃度比，K越大保留時(shí)間越長(zhǎng)。
- 保留時(shí)間（tR）：組分從進(jìn)樣到檢測(cè)器響應(yīng)最大值的時(shí)間，受流動(dòng)相組成、流速、柱溫影響。
- 檢測(cè)系統(tǒng)
- 功能：將分離后的組分轉(zhuǎn)化為可測(cè)量的信號(hào)（如電信號(hào)、光信號(hào)），實(shí)現(xiàn)定量和定性分析。
- 常用檢測(cè)器類(lèi)型：
- 紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器（UV-Vis）：
- 原理：檢測(cè)組分對(duì)特定波長(zhǎng)光的吸收（如254 nm用于芳香族化合物）。
- 特點(diǎn)：靈敏度高（ng級(jí)）、選擇性較好，但需組分有紫外吸收。
- 熒光檢測(cè)器（FLD）：
- 原理：檢測(cè)組分受激發(fā)后發(fā)射的熒光（如多環(huán)芳烴、某些藥物）。
- 特點(diǎn)：靈敏度極高（pg級(jí)），但僅適用于能產(chǎn)生熒光的組分。
- 質(zhì)譜檢測(cè)器（MS）：
- 原理：將組分離子化后按質(zhì)荷比（m/z）分離，提供分子量和結(jié)構(gòu)信息。
- 特點(diǎn)：通用性強(qiáng)、靈敏度高，可與液相色譜聯(lián)用（LC-MS）實(shí)現(xiàn)復(fù)雜樣品分析。
- 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）：
- 原理：將流動(dòng)相蒸發(fā)后檢測(cè)顆粒散射光，適用于無(wú)紫外吸收的組分（如糖類(lèi)、脂類(lèi)）。
- 特點(diǎn)：對(duì)流動(dòng)相揮發(fā)性要求高，靈敏度低于UV-Vis。
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發(fā)表于 2025-8-8 15:34:08
